MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生

摘要

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系，并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达，构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列，构建结构基因克隆，然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接，构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆，回收并纯化融合基因片段，显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序，筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠，且外源基因能稳定遗传给后代，从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型．