幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定

摘要

目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreaseB,UreB)编码基因的重组质粒,测定、分析其核苷酸序列,并在E.coliTop10中表达,研究其抗原性。方法应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增UreB编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hp感染患者血清进行Westernblot。结果扩增的UreB基因全长1704bp,并在GenBank上登录(No.DQ141576),与GenBank公布的其它Hp菌株的核酸同源性为97%～99%,表达的UreB融合蛋白的相对分子量为91000。29株小鼠抗Hp-全菌mAb中有6株是针对UreB抗原的,纯化产物可被病人血清和抗UreB的鼠单克隆抗体识别。结论重组UreB具有较好的抗原性,为Hp检测诊断和疫苗的研究奠定了基础。