α-淀粉酶成熟蛋白N-端氨基酸序列变化对蛋白分泌的影响

摘要

从地衣芽孢杆菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）构建的重组质粒ｐＡｍｙ４１３，经过定点诱变，在α－淀粉酶基因的２７１位引入Ｇ取代原来的Ａ，构建成突变型质粒ｐＡｍｙ４１３Ｃ。成熟的α－淀粉酶氨基酸由＋２Ａｓｎ变为＋３Ａｓｐ，其产量是野生型的２．０２－２．５７倍；Ｎ－端氮基酸序列分析发现：信号肽酶Ｉ的切割位点前移了一个氨基酸，即ＡｌａＡｌａ－＋３Ａｓｐ；二级结构分析发现：在自由能为－５１．７ｋｃａｌ时，突变型与野生型的ｍＲＮＡ都形成１４个环状结构，区别在于２７１位的Ｇ不再与２１１位的Ｕ配对，形成Ｇ突出；蛋白质二级结构分析发现：３３－３７氨基酸的转角结构减少了１个氨基酸，这个氦基酸参与形成α－螺旋；这些空间结构和荷电氮基酸的变化有利于蛋白质的分泌。