重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定

摘要

目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定。方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSAcDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶NdeⅠ和BamHⅠ消化,然后用T4连接酶将两者连接,序列正确的阳性克隆转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人PSA蛋白,从细菌包涵体中纯化PSA蛋白,再用小剂量胰岛素激活PSA活性,观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin(Sg)。结果:利用原核表达技术得到了重组人PSA,在胰岛素作用下PSA被激活,活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586。结论:用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能。