日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、表达与鉴定

摘要

目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。结果PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%。SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1∶32000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明,纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。结论日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性。