无选择标记的植物表达载体的构建

摘要

以双元载体pBINPLUS为基础,在T-DNA侧翼区通过2次特异PCR、酶切和连接相结合的方法,构建了1个无标记载体pBINMF(marker-free vector)。通过酶切后测序分析,这个无标记载体在T-DNA左、右边界之间只有1个多克隆位点(multiple cloned sites,MCS)。为了验证该载体的遗传稳定性,将gus基因克隆到该载体上并通过农杆菌介导的方法转化番茄栽培品种‘Moneymaker’,特异PCR扩增目的基因和GUS组织染色结果表明,gus基因已经整合进入番茄基因组并得以表达。该载体为今后直接获得无标记基因、生物安全的转化体,尤其可为马铃薯、木薯等无性繁殖材料的无标记基因转化提供可靠、有效的工具。