注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症体外作用机制

摘要

目的研究注射用胶原酶对磷脂酶A2活性的影响及对3种类型胶原蛋白的水解效率。方法不同剂量的胶原酶在不同时间内水解磷脂酶A2,其水解产物检测是通过SDS PAGE分析确认;以卵磷脂作为磷脂酶A2的底物,在反应体系中分别加入不同剂量的胶原酶以考察其对磷脂酶A2活性的影响;利用Lineweave r Burk双倒数法,求得磷脂酶A2水解卵磷脂的米氏常数(Km)以及反应体系含有胶原酶时的表观Km;分别以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型胶原蛋白为底物,在100 min内,考察每个反应体系在间隔10 min时产物生成量,以比较注射用胶原酶对不同类型胶原蛋白的水解效率。结果注射用胶原酶不水解磷脂酶A2,但对磷脂酶A2活性具有抑制作用,且随胶原酶剂量的加大,抑制作用也随之增强,磷脂酶A2水解卵磷脂的Km为0.95 mol.L-1,含有胶原酶时的表观Km为3.76 mol.L-1;注射用胶原酶对3种类型胶原蛋白水解活性不同,其水解速率是Ⅲ型>Ⅱ型>Ⅰ型。结论胶原酶在体外对磷脂酶A2活性的抑制作用是竞争性;在3种类型胶原蛋白中,对Ⅲ型的水解作用最强。