蚕豆萎蔫病毒纯化和病毒蛋白质及RNA组份分析

摘要

属蚕豆萎蔫病毒（ＥＢＷＶ）血清Ⅱ型的分离物Ｂ－９３４接种昆诺黎，采收的病叶先用含蔗糖的高浓度磷酸钾盐缓冲液，后用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理，成功地提取到了大量病毒粒子，提纯病毒得率为１３４ｍｇ／ｋｇ病叶。提纯病毒在电镜下可观察到大量球状病毒粒子，直径约２５ｎｍ。提纯的ＢＢＷＶ经甘油梯度超离心后可观察到３个组份，分别称Ｔ、Ｂ和Ｍ组份，其中Ｔ为空壳蛋白，Ｂ和Ｍ为核蛋白。各组份经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，证明其外壳蛋白均由两条多肽链组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ。病毒颗粒中ＲＮＡ组份分析及病叶组织中ｄｓＲＮＡ分析均表明，ＢＢＷＶ病毒基因组由两条单链ＲＮＡ分子组成，分子量约为２．２×１０￣６和１．５×１０￣６。电泳分析表明，ＢＢＷＶ病毒粒子电泳后产生类似于豇豆花叶病毒组（Ｃｏｍｏｖｉｒｕｓｅｓ）的两个电泳型。