蚓激酶在牛乳腺中的稳定表达

摘要

目的构建蚓激酶重组逆转录病毒载体,并在牛乳腺中稳定表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中,获得蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418筛选阳性细胞克隆,克隆扩大培养后,病毒上清转染妊娠7个月奶牛乳腺小叶组织。产犊后采奶样,FAPA法检测蚓激酶活性,并进行凝胶薄层扫描分析。结果蚓激酶重组逆转录病毒最高滴度约为1×104CFU/ml。奶牛产后奶样中蚓激酶基因在牛乳腺中可连续表达112d,活性相当于30000英国单位/L牛奶,在牛奶中表达量可达180mg/L牛奶。结论已成功构建蚓激酶重组逆转录病毒载体,蚓激酶可在牛乳腺中相对稳定地表达。