灰毡毛忍冬抑制表皮生长因子受体激酶活性及活性部位UPLC-Q-TOF/MS分析

摘要

应用高通量药物筛选技术，筛选发现具有表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）激酶抑制活性的中药提取物，同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC-Q-TOF／MS）对其活性部位进行分析和鉴别。灰毡毛忍冬药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后，得到4个相应的提取部位。采用均相时间分辨荧光（HTRF）法检测抑制EGFR激酶活性，于波长为620和665nm处测定荧光信号的变化及信号值，计算提取物对EGFR激酶的抑制率。采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱，以0．1％甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱，210—400nm扫描，使用ESI离子源，在正离子模式下采集数据。结果显示，灰毡毛忍冬的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR激酶抑制活性，IC50 为2．027μg／mL。Q—TOF／MS测定的一级、二级质谱信息及结合文献鉴定灰毡毛忍冬乙酸乙酯提取物中11个化合物，其中7个分别是：咖啡酸（caffeicacid），七叶内酯（esculetin），槲皮素（quercetin），3，5-二咖啡酰奎尼酸（3，5-O-dicaffeoylquinicacid），扁柏黄酮（hinokiflavone），绿原酸（chlorogenicacid），β-谷甾醇（β-sitoster01）。3，5-二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、扁柏黄酮为灰毡毛忍冬的主要成分，灰毡毛忍冬中含有的酚酸类和黄酮类化合物可能是抑制EGFR激酶活性的主要成分。