大鼠脑星形胶质细胞体外培养方法的改进及鉴定

摘要

目的探索大鼠脑星形胶质细胞（astrocytes，AS）的分离、培养及对原代培养的As进行纯化的方法并进行改进，提高AS纯度，为研究AS的生物学作用提供模型。方法取新生1—3d的SD大鼠大脑，冰板上去除嗅球及海马，仔细剥离软脑膜，吸管反复轻柔吹打制备成细胞悬液，差速贴壁去除成纤维细胞，原代培养7～12d，待细胞相互融合并铺满培养瓶底部后，3次消化传代，胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）进行免疫荧光鉴定。比较方法改进前后AS纯度的变化。结果采用本实验改进的方法所分离培养出的AS纯度可达95％以上，方法改进后较改进前所培养的AS细胞GFAP免疫荧光阳性率（即AS细胞纯度）显著提高（P〈0．05）。结论经改进后的AS培养方法能够获取高纯度的AS，用于建立AS体外模型及研究体系。