细胞角蛋白19-mRNA定量检测

摘要

目的基于水母发光蛋白生物发光免疫分析技术，建立一种细胞角蛋白19-mRNA（CK19-mRNA）定量检测技术。方法用生物发光分析技术检测淋巴细胞的CK19-mRNA。利用RT—PCR对CK19-mRNA进行放大,PCR引物的5′端用生物素标记，然后用交联了地高辛寡核苷酸探针与目标生物素化的DNA模板杂交。杂交复合物与包被在微孔板上的链亲合素结合，加入标记了水母发光蛋白的地高辛抗体与地高辛特异结合，再加入钙离子激发水母发光蛋白发光，发光强度正比予CK19-mRNA的量。结果该技术的线性范围可达5个数量级，标准曲线的直线回归系数r=0．98～0．99，探测灵敏度可达22amol／L的CK19-mRNA产物。重复性检测中，批间变异系数〈70％，批内变异系数〈6％。结论生物发光分析技术是一种灵敏可靠、非放射性的微量CK19-mRNA定量方法。