HDAC3缺失抑制小鼠肝再生并引起肝细胞凋亡

摘要

目的:检测组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylases 3,HDAC3)的缺失对部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后肝细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:通过HDAC3^(flox/flox)小鼠和他莫昔芬(tamoxifen,TAM)诱导的ALB-CRE^(ERT)工具鼠杂交,获得TAM诱导肝脏中HDAC3敲除小鼠(ALB-CRE^(ERT)HDAC3^(flox/flox)mice).Western blot和组织学分析分别检测TAM诱导的ALB-CRE^(ERT)HDAC3^(flox/flox)小鼠肝脏中HDAC3的敲除效率以及组织学改变.通过70%PH构建肝再生模型,并在相应时间点取材.溴脱氧尿苷(5-Bromo-2-deoxyuridine,BrdU)掺入实验和Ki67免疫组织化学染色评估肝细胞增殖情况.Western blot检测细胞周期蛋白(cyclins)和细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent-kinases,CDKs)的表达水平.原位缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)和凋亡标志物Cleaved Caspase3蛋白表达水平反映肝细胞的凋亡.结果:TAM诱导的ALB-CRE^(ERT)HDAC3^(flox/flox)小鼠(HDAC3~△小鼠)肝脏中HDAC3表达水平显著降低,但其肝脏结构和代谢并不发生明显改变.BrdU和Ki67免疫组织化学染色结果显示70%PH后36h和48 h肝细胞增殖率明显降低Western blot显示HDAC3~△小鼠cyclin B和cyclin D表达水平显著降低而CDK2和CDK4的表达水平无显著差异,组织学及Western blot均提示肝再生期间肝细胞凋亡增多.结论:HDAC3在小鼠肝再生中起至关重要的作用,HDAC3的缺失抑制肝再生并引起肝细胞凋亡.