黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)和Cyt C的影响

摘要

目的:探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制.方法:应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,透射电镜观察线粒体的变化:应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜电位、细胞内Ca^(2+)的改变。荧光发光法检测细胞色素(cytochrome C,Cyt C)含量,Bcl-2蛋白表达和流式细胞仪测定caspase-3活性.结果:黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,线粒体结构出现明显改变;肝癌细胞线粒体膜电位降低,6h、24h、48h分别为85.49±2.17、82.59±2.18、28.45±2.39;细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放增加,Bcl-2蛋白表达下降和caspase-3活性增加.在6h、24h、48 h时细胞线粒体膜电位,细胞内Ca^(2+)和Cyt C的释放分别为(6h:85.49±2.17、19.56±2.09、35.36±3.21:24h:82.59±2.18、14.76±1.03、44.57±5.56:48h:28.45±2.39、88.79±4.32、78.63±7.65).结论:线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进caspase-3活性增加,使细胞内Ca^(2+)增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,降低线粒体跨膜电位,促进Cyt C的释放.