猪圆环病毒2型吉林地方株ORF2基因的克隆、测序及其在原核细胞中的表达

摘要

根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,设计合成1对特异性引物,用PCR方法从接种PCV2吉林株(JL01)PK-15细胞中,扩增出PCV2毒株的ORF2基因。将扩增片段克隆于pMD18-T载体,进行序列测定。结果表明,PCV2 JL01毒株的ORF2基因核苷酸长度为702bp。将重组质粒用SalⅠ和XhoⅠ酶切后与同样处理的pET-32a载体连接,转化BL21细胞后,挑取阳性克隆。经PCR和酶切鉴定后,用IPTG诱导,细菌裂解液经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ORF2基因在大肠杆菌中得到了表达,并能被PCV2阳性血清所识别。