细胞色素P450 2J2在细胞模型中具有抗动脉粥样硬化作用

摘要

目的通过在离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)以及人外周单核细胞来源的泡沫细胞模型上过表达细胞色素P450 2J2(CYP2J2),探讨CYP2J2对动脉粥样硬化的影响。方法构建p LVX-IRES-Zs Green1-CYP2J2慢病毒载体,感染HUVEC及人外周单核细胞来源的泡沫细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测CYP2J2在细胞内的表达情况。离体培养HUVEC分为空白对照组、空载体组(p LV组)和CYP2J2基因过表达组(p LV-CYP2J2组),通过MTS法分别于转染后的12、24、48、72 h测定细胞的增殖情况,通过Transwell实验检测48 h后的细胞迁移能力。另外,采用密度梯度离心法从冠心病患者外周血中分离出单核细胞,以50 nmol/L佛波酯刺激48 h使之转化为巨噬细胞,然后加入终浓度为80 mg/L的氧化型低密度脂蛋白使之转化为泡沫细胞;细胞亦分为空白对照组、p LV组和p LV-CYP2J2组,培养48 h后收集细胞,然后通过油红O染色观察细胞内脂滴变化,通过总胆固醇测定试剂盒检测细胞内总胆固醇的含量。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,p LV-CYP2J2病毒感染后,HUVEC以及泡沫细胞中CYP2J2的mRNA和蛋白表达均显著升高。与空白对照组、p LV组相比,p LVCYP2J2处理显著增强了HUVEC在24、48、72 h的细胞增殖能力以及在48 h的细胞迁移能力,而对12 h的细胞增殖则无统计学差异。在人外周单核细胞来源的泡沫细胞模型中,p LV-CYP2J2处理显著降低了泡沫细胞的数量、泡沫细胞内油红脂滴的数量以及总胆固醇的含量。结论 CYP2J2基因过表达可促进HUVEC的细胞增殖和迁移,降低人外周单核细胞来源的泡沫细胞形成,提示CYP2J2具有抗动脉粥样硬化的作用。