实时定量RT-PCR检测马动脉炎病毒

摘要

选取马动脉炎病毒 (EAV )基因组中高度保守的开放阅读框 7(ORF7)序列 ,设计了特异性引物和 Taq Man探针 ,利用一步法的实时定量 RT- PCR来定量检测 EAV。使用含有选定检测序列的克隆标准品做标准曲线 ,证明该方法可以检测出含有 5 (4.77)个 RNA分子 ,即可从组织培养液 (TCF)中检出一般含有 5 PFU/μL 病毒拷贝。对猪生殖呼吸道综合征病毒、马疱疹病毒无交叉反应 ,特异性好。用疫苗用种毒 (Bucyrus标准株 )肌肉注射于马驹后 ,定量 RT- PCR比病毒分离试验更能灵敏地检出呼吸道排出的病毒。对 4 5 6份临床鼻腔分泌物样品检测 ,定量 RT- PCR检出 6份阳性 ,而病毒分离只检出 2份阳性。一步法实时定量 RT- PCR检测样品中的 EAV,在快捷、准确、方便和高通量方面优于细胞培养病毒分离的检测方法 ,可以作为检测马病毒性动脉炎 (EVA )