联合表达PCV2 ORF2和PPV VP2基因病毒样颗粒获得及免疫原性

摘要

将包含有完整闼读框架，长1740、705bp的PPVVP2基因、PCV2ORF2基因分别插入真核表达载体pPI-2．EGFP，构建了重组质粒pPi-Z．EGFP．VP2．ORF2。观察由脂质体介导转染重组质粒后的Vero细胞，结果最早在转染后20h左右出现荧光，36h达到高峰；对转染细胞进行电镜检测，结果观察到病毒样颗粒存在。为证实所获病毒样颗粒是否为重组颗粒，将纯化后的病毒样颗粒免疫仔猪，检测其血中T淋巴细胞的动态变化以及血清抗体水平。结果免疫仔猪的CD3＋、CD4＋T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高；CD8＋T淋巴细胞在免疫后7～14d有所下降，之后再升高。抗体检测结果表明，免疫动物血清中有较高水平的PPV、PCV2特异性抗体。结果表明重组质粒pPI-2．EGFP．VP2．ORF2获得成功表达并形成重组病毒样颗粒，且该颗粒具有良好的免疫原性。