细胞毒淋巴细胞相关抗原4融合蛋白靶向树突状细胞作用的体外研究

摘要

目的:研究细胞毒淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)靶向重组质粒pGJGLU/GFP在COS-7细胞中的表达水平,并研究CTLA-4融合蛋白的生物学活性,检测融合蛋白能否与体外培养的抗原递呈细胞树突状细胞靶向结合。方法:质粒pGJGLU/GFP体外转染COS-7细胞,荧光显微镜下观察蛋白的表达,利用双抗夹心法,以人IgG作为标准品,检测培养上清中蛋白的表达水平。体外培养人外周血来源的树突状细胞,并与浓缩的上清液作用,通过流式细胞术检测结合在树突状细胞表面的蛋白,在封闭(C组)与未封闭(B组)树突状细胞表面CTLA-4配体,即B7分子的条件下,比较树突状细胞的平均荧光强度,实验设置阴性对照(A组)。结果:转染后的COS-7细胞高表达绿色荧光融合蛋白,ELISA方法检测到浓缩后上清中蛋白浓度约相当于0.62mg/L人IgG。流式细胞术检测到B组细胞平均荧光强度明显高于A组和C组,而A组与C组细胞平均荧光强度没有明显差异。结论:靶向重组质粒pGJGLU/GFP在COS-7细胞中高表达CTLA-4融合蛋白,蛋白具有CTLA-4的活性并与体外培养的树突状细胞特异性结合。