人67KDa层连蛋白受体前体蛋白的基因克隆、表达及其免疫原性

摘要

［摘 要］目的 克隆、表达人67KDa层连蛋白受体前体蛋白（67KDa laminin receptor precursor，LRP）并检测其免疫原性。方法 应用RT－PCR从胃癌细胞9GC7901中扩增编码LRP的cDNA，将其按照T-A克隆法重组入pUCm－T载体并进行DNA序列测定。采用DNA重组技术构建原核表达载体pQE30-LRPP；用M15/pQE系统表达6×组氨酸与 LRP的融合蛋白，并以 SDS－PAGE和Western blot鉴定所获融合蛋白。用含融合蛋白的聚丙烯酸胺凝胶颗粒免疫小鼠，以 Westem blot检测小鼠血清的抗体活性。结果 DNA测序结果证实所扩增的cDNA片段与 LRP的基因序列完全相符。SDS－PAGE检测显示，经IPTG诱导2h后，M15/pQE30－LRP总蛋白中出现一条34KDa的新生蛋白带，Western blot进一步证实该新生蛋白为融合蛋白。其免疫小鼠血清经 Western blot检测仅识别SGC7901细胞中一条大小约为42KDa的蛋白带；其血清即使被稀释2000倍，仍然显示与靶蛋白有较强的结合活性。结论 成功地克隆、表达了人LRP，并具有良好的免疫原性。