phyA基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

摘要

利用自行筛选、鉴定的黑曲霉F246,根据植酸酶(phyA)基因成熟肽编码序列设计引物,直接PCR扩增phyA,经酶切分析、DNA测序分析证实phyA基因克隆成功。从pMD18T-phyA克隆中获得phyA编码序列,将其与pET30a+质粒连接,构建pET30a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组质粒经IPTG诱导表达,SDS-PAGE特异区带分子量为50 kDa,此重组蛋白占大肠杆菌可溶性蛋白的36.62%,酶活性较天然植酸酶高8倍以上。本研究为大量获得高活性植酸酶以及开发新型微生态制剂奠定了基础。