干扰烟草GA 20-氧化酶siRNA植物表达载体的构建及矮化烟草的产生

摘要

根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的目的片段,插入到双元载体质粒p2355中,成功构建了含GA20-氧化酶基因片段的反向重复序列植物表达载体p23700,其转录产物能形成发夹RNA(hpRNA),产生小分子干扰RNA,干扰目的基因的表达.将p23700质粒导入根癌农杆菌EHA105中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得表型矮化的转基因烟草.