羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌细胞凋亡模型的构建

摘要

目的:建立羟基磷灰石纳米粒子体外诱导人肝癌细胞凋亡的模型,为进一步研究纳米粒子诱导肝癌细胞凋亡的分子机制奠定基础.方法:用羟基磷灰石纳米粒子以不同终浓度、不同时间作用于人肝癌BEL—7402细胞,用细胞毒性实验(MTT比色法)观察其细胞毒性,倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法观察凋亡在形态学和生化方面的变化.流式细胞仪分析以进一步了解凋亡发生的时间和程度.结果:羟基磷灰石纳米粒子以剂量依赖和时间依赖的方式抑制 BEL-7402细胞的生长.50-200 mg/L的纳米粒子处理 48 h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征.琼脂糖凝胶电泳观察到DNA“梯带”.流式细胞仪定量分析,0,50、75、100、150、200 mg/L浓度下凋亡率分别为2.2％,20.3％,25.3％,29.8％,45.1％和53.1％.50 mg/L作用 12 h后肝癌细胞出现凋亡,48 h达高峰,12,24,36,48 h 细胞凋亡率分别为 2.7 ％,3.5％,6.3％和 21.4％.结论:羟基磷灰石纳米粒子既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增生,又能诱导其凋亡,该凋亡模型的成功建立将有助于进一步探讨纳米粒子诱导肝癌细胞凋亡的分子机制.