单链构象多态性分析检测脂蛋白脂酶基因变异

摘要

目的:建立聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测脂蛋白脂酶（LPL）基因Hind　Ⅲ多态性、Ser447Ter多态性及-93T/G基因突变的方法。方法:5μl Hind Ⅲ多态性或-93T/G基因突变的PCR产物和5μl甲酰胺变性液混匀变性,室温下用8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。5μl　Ser447Ter多态性的PCR产物和2μl甲酰胺变性液混匀变性,25℃左右用8％的聚丙烯酷胺凝胶电泳后银染。结果:PCR-SSCP成功检出LPL的Hind Ⅲ多态性、Ser447Ter多态性及-93T/G基因突变,并检出第9内含子50位一个G碱基缺失和启动子区域-85位一个C-T碱基置换即-85C/T。同时PCR-RFLP验证了200例标本的PCR-SSCP检测结果,两种方法检测已知基因变异时的结果完全一致。结论:PCR-SSCP法既能检测已知的LPL基因变异,也可检出未知的LPL基因变异,是临床实验室开展基因诊断的一种简便、有效的方法。