腺病毒介导BTEB2反义RNA对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

摘要

目的　构建携带反义锌指转录因子 2 (basictranscriptionelementbindingprotein 2 ,BTEB2 )基因的重组腺病毒载体并研究BTEB2反义RNA对平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖的影响。方法　从培养的大鼠VSMC中提取总RNA ,通过RT PCR制备BTEB2cDNA ,将其反向克隆至腺病毒载体 ,构建携带反义BTEB2基因的重组腺病毒Ad .ASBTEB2 ;用Ad .ASBTEB2转染VSMC ,通过RT -PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达 ;经免疫印迹法分析BTEB2反义RNA对BTEB2蛋白质表达的抑制作用 ;通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测BTEB2反义RNA对VSMC增殖及细胞周期的影响。结果　构建的重组腺病毒载体经鉴定正确 ,其滴度为 5× 10 9/ml ;VSMC被重组腺病毒感染后 ,可检测到BTEB2反义RNA的表达 ;Ad .ASBTEB2转染可明显抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖 ,使VSMC出现明显的G0 /G1期阻滞。结论　成功构建了携带反义BTEB2基因的重组腺病毒载体 ;重组腺病可在VSMC中表达BTEB2反义RNA ;