跨膜型TNF-α生物学活性的膜依赖性

摘要

跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)是激活的单核/巨噬细胞表达在胞膜上的完整蛋白分子。为了确定TM-TNF与细胞膜的关系,本文借助体外转录翻译系统及微粒体膜结构,建立了表达在微粒体膜上的TM-TNF以及无膜的裸26kD TNF。比较这两种体外表达产物对靶细胞的细胞毒效应,结果表明,只有在微粒体存在时所合成的26kD TNF具有细胞毒活性;而无微粒体存在所合成的裸26kD TNF不显示杀瘤效应。进一步用间接免疫荧光技术观察它们与HL60靶细胞胞膜上TNFR的结合情况,结果显示,结合在微粒体膜上的TM-TNF能与TNFR有效结合,而裸26kD TNF与TNFR则不能有效结合。提示TM-TNF只有“锚定”在细胞膜上,才能利于其空间构型的展示,发挥生物学效应;而一旦与膜分离,则不能与TNFR有效地结合,故丧失了其生物学活性。