7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因的启动子活性检测、转录起始点的确定

摘要

分别从重组质粒ｐＵＢ１及其Ｍ（１３）亚克隆Ｓ１中将７号淀粉酶链霉菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓＮｏ．７）Ｍ１０３３（以下简称Ｓ．ｄｉ．Ｍ１０３３）木糖异构酶基因的－１９２－＋５８１ｂｐ片段克隆入链霉菌启动子探测质粒ｐＩＪ４０８３中，转化变铅青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ２４。通过对其邻苯二酚加双氧酶活性的检测表明，该片段具有启动子活性。应用Ｍ１３亚克隆Ｓ１和合成引物Ｐ６延伸制备放射性标记的单链ＤＮＡ探针；通过Ｓ．ｄｉ．Ｍ１０３３的总ＲＮＡ的Ｓ１核酸酶保护实验，确定了其转录的起始位点，并由此探讨了与木糖异构酶基因表达有关的一些因素。