金黄色葡萄球菌肠毒素C2基因定点突变分析

摘要

目的利用金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因His118定点突变,以获得超抗原性保持不变的减毒肠毒素。方法利用PCR介导的定点突变技术,对SEc2基因中的His118密码子进行定点突变,得到的带有突变基因的表达质粒在大肠埃希菌中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。采用镍离子金属整合(Ni-NTA)亲和层析和凝胶过滤层析纯化突变体蛋白,并测定突变体蛋白超抗原性及体外抑瘤效果。结果应用点突变试剂盒,PCR扩增得到SEc2突变体表达质粒pET-28a-SEC2(H118Y)在1mmol/LIPTG诱导下高效表达。突变体蛋白SEC(H118Y)在2～200 ng时刺激人体细胞增殖效果与SEC2基本一致,体现二者具有相同的超抗原性。SEC(H118Y)时,在2～200 ng与SEC2抑制大肠癌细胞Cx-1效果基本相同,而在500 ng时,SEC(H118Y)抑瘤效果明显优于与SEC2。结论SEC(H118Y)超抗原性和抑瘤活性没有因His118位点的突变而改变。