梅毒螺旋体TpN15抗原重组表达及rTpN15-ELISA血清学检测效果

摘要

目的:克隆并构建梅毒螺旋体tpN15基因原核表达系统,建立基于rTpN15的ELISA并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法:采用PCR扩增tpN15基因,构建tpN15基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpN15表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rTpN15,Western blot鉴定rTpN15的免疫反应性。以rT-pN15为包被抗原,建立rTpN15-ELISA并用于检测138例梅毒病人血清,其检测结果与RPR和TPHA进行比较。结果:克隆的tpn15基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rTpN15表达量为细菌总蛋白的23.4%。提纯的rTpN15在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。TPHA阳性的梅毒病人血清能有效识别rTpN15并与之结合。rTpN15-ELISA对梅毒病人血清标本检测阳性率为96.4%(133/138),与TPHA检测阳性率(97.8%,135/138)相近(P>0.05),rTpN15-ELISA和TPHA检测阳性率均显著高于TRUST(82.6%,114/138)(P<0.01)。结论:本研究中成功地克隆并构建了梅毒螺旋体tpN15基因及其原核表达系统。以rTpN15为包被抗原的rTpN15-ELISA可作为快速、简便、敏感和特异的梅毒血清学筛查方法。