生长激素释放因子肝脏定向表达复合物在家兔体内的表达

摘要

外源基因在体内的转染及表达存在转染效率低、表达时间短等缺点 ,利用受体介导基因转移技术 ,可以将基因定向转入到特定组织 ,并且能提高转染效率和表达时间。在本试验中 ,利用肝脏去唾液酸糖蛋白受体 (ASGR)将生长激素释放因子 (GRF)基因定向转入到家兔肝脏组织并得到了表达。首先通过 DNA阻滞试验确定质粒 DNA与多聚赖氨酸 (poly- L- lysine,PL L)的结合比例及反应液的最佳 Na Cl浓度 ,然后将 PL L 与 α- D-吡喃半乳糖苯基异硫氰酸盐 (α-D- galactopyranosylphenyl isothiocyanate) (物质的量之比为 8∶ 1)在 p H9.0的 Na2 CO3溶液中进行糖基化反应 ,得到糖基化的 PL L(gal PL L)后透析除去未反应的糖并测定反应物糖含量。将糖基化的 PL L 与克隆有 GRF基因的 pc D-NA3- GRF质粒 (质量比为 3.16∶ 1)在 1.0 31m ol/ L的 Na Cl溶液中进行连接 ,最终得到 DNA- gal PL L复合物 ,电镜观察其结构。耳缘静脉注射质粒复合物到家兔体内 (1.5 mg/只 ) ,用 RT- PCR和 EL ISA检测不同组织的表达情况。结果注射后 7d家兔的肝脏 RT- PCR结果呈阳性 ,2 7d仍能检测到 GRF蛋白 ,但同时在其他的组织也检测到表达。并且进行了增重试验 ,发现定向转移