阴道毛滴虫沉默信息调节因子2同源基因的原核表达载体构建及表达

摘要

提取阴道毛滴虫(T.vaginalis)LX006细胞株传代培养细胞总RNA,RT-PCR扩增Tv-Sir2-like全长cDNA链,扩增产物连接到T-A克隆载体并转化大肠埃希菌(E.coli)JM109。提取重组克隆质粒,并用限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ进行双酶切,将目的基因定向克隆到原核表达载体pET-41b,并在E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果显示目的基因定向克隆于原核表达质粒pET-41b获得了表达重组子,IPTG诱导该原核表达载体在E.coliBL21中表达相对分子质量(Mr)约为59000的重组融合蛋白,表达量占菌体总蛋白量的30%。