人CyclinD3基因启动子区的分子克隆及在A2780细胞中的功能分析

摘要

目的对Cyclin D3启动子的结构和功能进行分析。方法用PCR的方法扩增不同长度的Cyclin D3启动子片段。将PCR产物克隆入荧光素酶报道载体pGL3-Basic Vector,构建含有Cyclin D3启动子片段的重组子pD3-。双荧光素酶报道系统检测重组子pD3-在A2780细胞中的启动子活性,筛选关键转录调控区域。TFSEARCH 1.3 v分析该区域,结合文献复习筛选可能的转录因子。结果用PCR方法扩增出了不同长度的Cyclin D3启动子片段。上述片段克隆到pGL3-Basic中,构建了重组子pD3-。双荧光素酶报道系统发现在Cyclin D3启动子上游-1044 bp至-766 bp之间、-362 bp至-197 bp之间,分别存在一个正性调控区域。-766 bp至-551 bp之间存在一负性调控区域。TFSEARCH发现在上述调控区中存在C/EBP、SP1、AP1、HSF和MZF1等转录因子的结合基序。结论在Cyclin D3启动子片段上游-1044 bp至-766 bp之间、-362 bp至-197 bp之间,分别存在一个正性调控区域;-766 bp和-551 bp之间存在一负性调控区域。转录因子C/EBP、SP1、AP1、HSF和MZF1等可能在Cyclin D3的转录调控中发挥重要作用。