重组人胰高血糖素样肽-1的表达及生物学活性

摘要

将人工合成的人胰高血糖素样肽-1（human glucagon—like peptide-1，hGLP-1）基因插入质粒栽体pET-32a（＋）中，构建成rhGLP-1与硫氧还蛋白（thioredox）及六聚组氨酸（hexahistidine）的融合表达栽体pET32-GLP-1，转化大肠杆菌BL21（DE3）获得表达菌株，经LPTG诱导发酵的菌体超声破碎后，裂解液用Ni离子亲和层析纯化得到融合蛋白，经肠激酶裂解，再次Ni离子亲和层析，得到rhGLP-1样品。经SDS—PAGE和等电聚焦检测，样品纯度大于90％，等电点介于pH5．2-pH5．85之间。质谱测定rhGLP-1分子量为3355．0kDa，肽图分析得到2097．7kDa和1005．5kDa两个胰蛋白酶酶解片断，均与理论分析结果一致。动物实验表明重组蛋白具有明显的降血糖活性和促胰岛素分泌作用。