一种新型的基因表达水平检测方法

摘要

目的 :建立一种简便、特异的检测组织血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )受体基因表达变化的半定量逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)技术。方法 :采用异硫氰酸胍 酚 氯仿法提取组织总RNA ,用生物素 (biotin ,B)标记的AngⅡ受体的特异引物进行RT PCR扩增 ,PCR产物纯化后 ,再与过氧化物酶标记生物素竞争性地结合包被到酶标板上的亲和素 (avidin) ,经过显色反应并测定其吸光度值可反映特异性PCR产物量 ,从而推断模板核酸中AngⅡ受体基因的相对含量。结果 :异硫氰酸胍 酚 氯仿法提取组织总RNA的质量较高 ;PCR的最适反应条件为 94℃变性 30s、5 9℃退火 40s、72℃延伸 6 0s,循环 33次 ,最后 72℃延伸 5min ;酶标仪所测阴性对照和扩增产物光密度之差能够反映不同模板中AngⅡ受体基因的相对含量。结论 :该方法是一种简便、特异、可行的半定量RT