人巨细胞病毒感染新生乳鼠原代培养脑神经细胞研究

摘要

为了研究确定人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）体外感染Ｂａｌｂ／ｃ新生乳鼠原代培养脑神经细胞及其感染特征，制备和培养了新生乳鼠脑神经细胞并进行病毒感染。感染后每隔２～３天在倒置显微镜下观察活细胞培养物并摄影记录。在感染后第１～４周，取样进行苏木素－伊红（ＨＥ）染色及尼氏（Ｎｉｓｌ）染色。同时，用已知抗ＨＣＭＶ外膜蛋白的单克隆抗体进行免疫细胞化学染色，和地高辛标记的ＨＣＭＶ寡核苷酸特异性探针进行原位杂交，检测相应病毒核酸及胞内定位。结果在病毒感染后的第２周，受染细胞出现明显病变，表现为颗粒增多，折光性减弱。ＨＥ染色可见，受染神经细胞明显肿胀，胞浆及胞核均为嗜酸性，并可见到嗜酸性包涵体。Ｎｉｓｓｌ氏染色发现，胞核旁的尼氏小体变小，成粉末状，甚至消失。免疫细胞化学染色显示，受染神经细胞呈阳性反应。原位杂交结果证实，病毒核酸存在于受染细胞的胞浆及核内。这表明，ＨＣＭＶ能感染体外原代培养的新生乳鼠脑神经细胞，且病理特征与在人胚脑神经细胞观察到的基本模式一致。这种体外培养的细胞模型，可用于ＨＣＭＶ致中枢神经系统感染的研究。