大麦脱水可诱导启动子的克隆及其瞬间表达载体的构建

摘要

为进一步研究脱水可诱导启动子的结构和功能,并为开展禾谷类植物转基因研究选择启动子提供依据,用大麦品种撒哈拉幼苗提取的总DNA为模板,利用设计合成的引物对进行PCR定向扩增,获得了HVA1s、Dhn4s和Dhn8s启动子片段。通过分离、纯化、酶切和连接,把启动子片段分别插入到带有GFP和GUS报告基因的表达载体质粒中。经测序确认,目标启动子片段与原报道的同源启动子序列一致性达95.3%以上。HVA1s、Dhn4s和Dhn8s启动子在构建的瞬间表达载体pHVA1sGFPG、pDhn4sGFPG、Dhn8sGFPG和pHVA1sGUSR、pDhn4sGUSR、pDhn8sGUSR中,都具有启动表达报告基因的能力,通过基因枪转化大麦幼苗可有效启动gfp和gus基因瞬间表达。