负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响

摘要

目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-mi R149对人肝癌细胞株增殖的影响。结果成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5×109 pfu/ml。采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒。采用PCR扩增,Ad-mi R149可获得腺病毒及micro RNA-149特异片段,而对照AdLac Z只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-mi R149可显著抑制肝癌细胞株增殖。结论成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用。