人源性抗乙酰胆碱受体自身抗体的构建及特异性鉴定

摘要

目的用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(MG)的实验研究提供人源性抗体材料。方法应用PCR技术从分离自MG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1上,构建人源性抗AchR自身抗体哺乳类细胞表达的重组载体pIgG1-637。将pIgG1-637转染CHO-k1细胞,细胞培养上清液经斑点杂交试验检测抗体的表达,以放射免疫测定法测定表达的抗体与特异性人AchR结合的活性。结果细胞培养24h后能检测到抗体的分泌,表达的抗体能特异性地与抗原结合,且结合活性很高。结论已成功地构建了具有与抗原特异性结合的人源性IgG1类抗人AchR自身抗体IgG1-637。