Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

摘要

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因，插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游，构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ，使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞，在选择培养基中筛选阳性克隆，用氨甲喋呤加压扩增，建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠，２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体，表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性，可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。