靶向肝癌细胞的重组腺相关病毒载体的构建

摘要

目的　构建以甲胎蛋白增强子(AFP E)和白蛋白启动子(ALB P)联合转录调控序列(AFPenh+ALBprom, EP)为启动子的重组腺相关病毒基因治疗载体,用于肝细胞肝癌(HCC)的靶向基因治疗研究。方法　用PCR方法扩增EP基因片段,将EP基因片段顺义克隆至重组腺相关病毒载体系统(AAV Helper Free System)中表达质粒 pAAV IRES hrGFP的启动子位点,并替换其原有的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建出以 EP为启动子的表达质粒 pAAV IRES hrGFP EP; 再将 pAAV IRES hrGFP EP与 AAV Helper Free System中的控制质粒pAAV RC和辅助质粒 pHelper用脂质体转染法共转染人胚肾细胞(293 细胞),生成以 EP 为启动子的、可用于HCC靶向基因治疗的重组腺相关病毒载体(rAAV EP)。结果　成功构建并包装出以 EP为启动子的重组腺相关病毒载体 rAAV2 EP,病毒滴度达1.2×105/ml。结论　构建的以腺相关病毒为载体、受 AFP E和 ALB P联合转录调控序列驱动的重组腺相关病毒载体 rAAV2 EP,可望能用于HCC靶向基因治疗研究,并为肝脏疾病的靶向基因治疗提供先进载体系统。