美洲黑杨I-69树皮中多酚氧化酶同工酶的提纯和特性

摘要

美洲黑杨Ⅰ-69树皮内有两个多酚氧化酶同工酶(ppo A和B)。ppo A和B经硫酸铵沉淀,Sephadex G-100和DEAE-纤维素柱层析分别提纯6.7和5.9倍,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一的带。ppo A和B的分子量为38900和33000。ppo A含赖氨酸残基最多(86个),含精氨酸残基最少(3个),不含酪氨酸和脯氨酸残基;ppo B含丝氨酸残基最多(37个),含精氨酸残基最少,不含酪氨酸和色氨酸残基。ppo A和B的最适pH为6.4和7.0,最适温度为50℃和45℃。ppo A比B具有较好的热稳定性。在测定的酚类化合物中,ppo A和B对邻苯二酚的亲和性最大,K_m值最小,分别为0.39mM和0.34mM,均属邻苯二酚酶。ppo A和B的活力受1mM的L-半胱氨酸、硫代硫酸钠、硫脲、二乙基二硫代氨基甲酸钠、氯化钠和蔗糖抑制及被0.1mM的氯化钠和蔗糖促进。