不同长度丁型肝炎病毒核酶的体外自剪切活性及其意义

摘要

目的分析不同长度丁型肝炎病毒核酶的体外自剪切活性。方法用XbaⅠ,EcoRⅠ或BamHⅠ将含有HDV.Rz序列的pRz277正向质粒(pRz277A)和pRz277反向质粒(pRz277B)线性化,以α-^(32)p-UTP标志和T7噬菌体RNA聚合酶转录出不同长度的基因组核酶(g.Rz)和抗基因组(即复制中间体)核酶(ag.Rz),在一定条件下进行自剪切反应,然后作聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和放射自显影。结果 g.Rz24/100(自剪切位点5和3端分别含24nt和100nt,下同)、ag.Rz38/119在适当条件下绝大部分发生自剪切。g.Rz24/253和ag.Rz38/239也具有一定自剪切活性,但显著低于前两者,即使温度升至55℃或加入去离子甲酰胺也是如此。结论适宜长度的HDV.Rz在体外具有较高的自剪切活性。这些发现有助于我们下一步研究HDV.Rz的反式剪切作用。