食管癌相关基因NGAL四种融合表达载体的构建及其蛋白表达产物的比较分析

摘要

目的 :筛选出能高效表达且可溶性好的NGAL(neutrophilgelatinase associatedlipocalin)融合表达载体。方法 :将NGALcDNA全长片段分别定向克隆到表达载体的BamHI +EcoRI位点 ,构建NGAL基因的 4种融合表达载体 ,然后分别转化大肠杆菌并进行IPTG诱导小样表达 ,监测各NGAL融合蛋白在不同诱导时间内的表达量及其可溶性等。选择pHis NGAL和pDsbA2 0 NGAL进行IPTG诱导大样表达 ,通过SDS PAGE比较表达产物的量与可溶性。结果 :成功构建出 4种NGAL融合表达载体。经IPTG诱导小样表达后 ,4种载体的表达水平及其可溶性明显不同 ,DsbA2 0 NGAL、His NGAL和Trx NGAL融合蛋白表达量分别占菌体总蛋白的 33 3%、32 3%、2 8 7% ,而它们的可溶性部分分别占各自总NGAL融合蛋白的96 8%、95 3%和 6 3 0 %。对pDsbA2 0 NGAL和pHis NGAL进行IPTG诱导大样表达后发现 ,DsbA2 0 NGAL融合蛋白的表达量与可溶性较好。结论 :pDsbA2 0 NGAL表达载体是能高效表达且可溶性好的NGAL融合蛋白表达载体。