小鼠IL-18 cDNA克隆及在H_(22)肝癌细胞中的初步表达

摘要

目的 构建小鼠白细胞介素-18（mIL-18）逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达。方法 用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μmL G418进行筛选。挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞。用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-r生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况。结果 用NH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-r诱生作用。结论 pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18。