人肝金属硫蛋白-I_A基因在鱼腥藻中的克隆与表达

摘要

将人工合成的人肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ）－ＩＡ基因插入至中间载体ｐＲＬ－４３９上强启动子ｐｓｂＡ后，再将其与穿梭载体ｐＫＴ－２１０相连，得到大肠杆菌－蓝藻穿梭表达载体ｐＫＴ－ＭＴ，用三亲接合转移法将ｐＫＴ－ＭＴ转入丝状体蓝藻－鱼腥藻７１２０，经链霉素筛选，得到了稳定的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻．纯化单藻落，液体扩大培养．从鱼腥藻中提取的质粒经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，确定人肝ＭＴ－ＩＡ基因已转入鱼腥藻７１２０中，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明，金属硫蛋白在转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻中得到了表达．经原子吸收光谱法测定表达量约为７００μｇＭＴ／ｇ鲜藻，重金属耐受性实验表明，得到了能耐受重金属－镉的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻，它将在清除水域中重金属污染和医药研究方面发挥重要作用．