三螺旋结构寡核苷酸序列对DHBV基因的连接及封锁抑制作用研究

摘要

目的　筛选与鸭乙肝病毒 (DHBV) DNAX C区目标基因特异连接的三螺旋结构寡核苷酸(TFO) ,探讨TFO对DHBV DNA的特异连接及抑制作用。方法　将人工合成的TFO与目标基因片断和含(DHBV)DNA的重组细胞反应 ,用电泳转移印迹、PCR和鸭肝原代细胞培养等技术观察TFO对相应基因的连接以及对细胞内DHBV DNA复制的抑制效应。结果　在所设计的多条TFO中 ,( 3 )TFO和 ( 5 )TFO在 3～ 4h内能与细胞内外目标基因双链直接连接 ,导致DHBV DNA复制一定程度的抑制 ;在DHBV DNA阳性的原代鸭肝细胞培养液中连续加入终浓度为 4μmol L的TFO ,大多数细胞组的培养液中DHBV DNA的检测在 10～12d开始呈现阴性。结论　TFO能直接与病毒的DNA连接 ,导致目标基因的复制抑制 ,有着潜在的特异抗病毒价值。