KDR为靶的反义寡核苷酸、siRNA活性比较

摘要

目的:观察反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,asONs),细胞内源性表达的短发卡状小干扰RNA(shorthairpinsmallinterferingRNA,siRNA)对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR:Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2/kinaseinsertdomain-containingreceptor)表达的抑制作用,探讨阻断DKR蛋白表达对MCF-7细胞增殖、生长的影响,并对两者作了比较。方法:设计了3条反义寡核苷酸,并根据其相应靶KDRmRNA杂交位点,构建了3条以质粒pPUR/U6为载体的可内源性表达短发卡状siRNA的pPUR/U6/KDR-siRNA。分别用Western-blotting方法检测了MCF-7细胞经反义寡核苷酸处理,pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染后对KDR蛋白表达的抑制作用;用MTT法观察了反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖的影响,并观察了pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染细胞的生长曲线。结果:3条反义寡核苷酸于0.8μmol/L时,均有效抑制了细胞KDR蛋白表达,抑制率分别为66.16%,50.21%,58.35%;3条反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖也显示了剂量依赖性下调作用。相应靶位点3条pPUR/U6/KDR-siRNA中,有2条在细胞稳定转染时显著下调了KDR蛋白表达,15天抑制率分别为75.21%,80.08%;30天时为59.29%,60.15%;细胞稳定转染表达siRNA后生长变慢。结论:可根据有效反义寡核苷酸靶位点设计siRNA。