Th1/Th9/Th17细胞失衡对实验性自身免疫性重症肌无力幼鼠的影响及机制初探

摘要

目的:对实验性自身免疫性重症肌无力(myasthenia gravis,MG)幼鼠采用双类似物(Lys262-Ala207)经鼻黏膜诱导免疫耐受后,了解实验幼鼠Th1/Th17/Th9细胞及产生相关细胞因子的细胞变化情况及其与EAMG幼鼠发病的相关性,探讨其调控作用机制。方法:将30只幼年雌性C57BL/6小鼠采用完全随机分组方法分为3组:模型组、耐受组和对照组。模型组经腹腔注射含1.0 mg/kg mAb35的Ringer’s液0.2 ml,建立EAMG模型;耐受组在致敏前10 d先经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207诱导黏膜耐受,再按照模型组方式进行处理;对照组注射不含mAb35的Ringer’s缓冲液0.2 ml。采用流式细胞仪检测小鼠脾脏细胞中分别代表Th1/Th17/Th9细胞功能的CD4+干扰素(interferon,IFN)-γ+细胞、CD4+白介素(interleukin,IL)-17+细胞和CD4+IL-9+细胞的含量。采用双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-17、IL-9的水平。结果:(1)MG的临床表现对照组明显轻于模型组和耐受组,而耐受组经双类似物免疫耐受后,其临床症状也较模型组明显减轻。(2)模型组、耐受组和对照组的CD4+IFN-γ+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(3)模型组、耐受组和对照组的CD4+IL-17+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(4)模型组、耐受组和对照组的CD4+IL-9+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00)。(5)模型组、耐受组和对照组的脾细胞上清中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00)。结论:采用Lys262-Ala207对实验幼鼠进行鼻黏膜耐受后不仅能有效的缓解其MG的临床症状,同时还能下调导致实验幼鼠发病的CD4+IFN-γ+细胞、CD4+IL-17+细胞和CD4+IL-9+细胞含量水平以及细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平,缓解Th1/Th17/Th9细胞功能失衡现象,从而达到预防和减轻实验幼鼠发病的作用。