培元固肾方含药血清对已转染HBV质粒的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin蛋白的影响

摘要

[目的]通过培元固肾方含药血清对已转染乙型肝炎病毒(HBV)质粒的人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)的干预,观察其对转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-cadherin蛋白表达的影响,探讨培元固肾方抗肾间质纤维化的作用机制。[方法]体外培养HK-2细胞,应用脂质体转染法,将扩增、鉴定后的质粒转染至HK-2细胞。将细胞分为7组,分别为:Mock组(常规培养的HK-2细胞组);Control组(转染空载质粒pHY106的HK-2细胞组);HBV组(转染空质粒与HBV复合物(PHY106-HBV)的HK-2细胞组);HBV+ACEI组(贝那普利组);HBV+PYGS Low组(培元固肾方低剂量组);HBV+PYGS Middle组(培元固肾方中剂量组);HBV+PYGS High组(培元固肾方高剂量组),实验分3个独立样本(n=3)。经HBV转染6 h后,予各组相应的药物进行干预。药物干预48 h后,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组细胞裂解液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)及TGF-β1的表达量;应用免疫细胞化学法检测α-SMA、E-cadherin的表达。[结果]培元固肾方各干预组对TGF-β1表达均有下调(P<0.001),对α-SMA蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.001),对E-Cadherin蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]培元固肾方可能通过抑制促纤维化因子TGF-β1的表达抑制乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)肾小管上皮细胞的表型转化,对上皮细胞标志性蛋白E-cadherin的表达具有上调作用,对肌成纤维细胞标记蛋白α-SMA的表达具有下调作用,从而防治HBV-GN肾小管间质纤维化。