口蹄疫感染与免疫动物鉴别诊断方法的建立

摘要

目的建立鉴别自然感染口蹄疫动物和口蹄疫灭活疫苗免疫动物的诊断方法。方法构建重组杆状病毒的转座质粒pFastBac-3AB,转化DH10 Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-3AB;将Bacmid-3AB转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。以重组杆状病毒表达的3AB蛋白为抗原建立鉴别口蹄疫感染与免疫动物的ELISA诊断方法,并对各种反应条件进行优化,包括抗原包被时间、包被浓度、封闭剂、酶标抗体工作浓度等。结果获得了重组杆状病毒,成功表达了口蹄疫病毒3AB蛋白,并用纯化的3AB蛋白建立了检测口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法。用该方法检测FMDV感染动物和免疫动物血清抗3AB蛋白抗体,猪和牛感染血清检测的阳性率分别为83.3%和91.7%。结论用纯化的口蹄疫病毒3AB蛋白建立了鉴别诊断口蹄疫感染与免疫动物的ELISA诊断方法。